蔗糖磷酸化酶（SP）試劑盒說明書 技術文章

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蔗糖磷酸化酶（Sucrose Phosphorylase,SP）試劑盒

商品貨號：QS2508
英文名稱：Sucrose Phosphorylase (SP) Assay Kit
別名：蔗糖磷酸化酶試劑盒 蔗糖磷酸化酶測試盒
檢測方法：常量法

• 產品詳細介紹

測定意義：

SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中，裂解葡萄糖苷鍵，催化葡萄糖基轉移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等，合成相應的葡萄糖基低聚糖。此外，SP還能催化氫醌合成熊果苷，具有*的美白效果，在化妝品工業中具有重要應用。

測定原理：

SP能夠以磷酸為受體，催化蔗糖產生1-磷酸葡萄糖，在葡萄糖磷酸變位酶催化下變位為6-磷酸葡萄糖，在6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下還原NADP+生成NADPH，導致340nm光吸收值增加。測定340nm吸光度增加速率，即可計算SP活性。

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• 產品說明書
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貨號：QS2508                                              規格：50 管/48 樣

蔗糖磷酸化酶（Sucrose Phosphorylase,SP）試劑盒說明書 紫外分光光度法

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義： SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中，裂解葡萄糖苷鍵，催化葡萄糖基轉移到果糖、 木糖、

半乳糖和鼠李糖等，合成相應的葡萄糖基低聚糖。此外，SP 還能催化氫醌合成熊果苷， 具有*的美白效果，在化妝品工業中具有重要應用。

測定原理：

SP 能夠以磷酸為受體，催化蔗糖產生 1-磷酸葡萄糖，在葡萄糖磷酸變位酶催化下變位為 6-磷酸葡萄糖，在 6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下還原 NADP+生成 NADPH，導致 340nm 光吸收值增 加。測定 340nm 吸光度增加速率，即可計算 SP 活性。

自備實驗用品及儀器： 天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計、1 mL 石英比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。 緩沖液：液體 40mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 2mL×1 支，4℃保存。

試劑三：液體 1mL×1 支，4℃保存。

試劑四：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存，臨用前加 5mL 雙蒸水溶解。

試劑五：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存，臨用前加 5mL 雙蒸水溶解。

試劑六：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存，臨用前加 10mL 雙蒸水溶解。

試劑七：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存，臨用前加 10mL 雙蒸水溶解。

粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加 入 1mL 提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清待測。

2. 細菌、真菌：按照細胞數量（10⁴個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時 間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

測定操作表：

             對照管    測定管

緩沖液（μ L）    850      650

試劑一（μ L）    500      500

試劑二（μ L）    30       30

試劑三（μ L）    20       20

試劑四（μ L）    100      100

試劑五（μ L）    100      100

試劑六（μ L）    200      200

試劑七（μ L）    200      200

混勻，37℃水浴預熱 5min

樣本（μ L）              200

迅速混勻，于 1mL 石英比色皿，對照管調零，測定 340nm 的初始值 A1，測定完立 即放入 37℃水浴準確反應 2min，迅速測定 340nm 吸光值 A2，△A= A2- A1。

SP 活性計算公式：

1. 按照蛋白濃度計算

酶活定義：37℃，pH6.8 時，每毫克蛋白質每分鐘催化產生 1nmol NADPH 為一個酶活單位。

SP 活性（nmol/min/mg prot）= △A / (s × d) ×V 反總÷V 樣÷Cpr÷T=804×△A÷Cpr

2. 按照樣本質量計算 酶活定義：37℃，pH6.8 時，每克樣本每分鐘催化產生 1nmol NADPH 為一個酶活單位。

SP 活性（nmol/min/g 鮮重）= △A / (s × d)  ×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T=804×△A÷W

3. 按照細胞數量計算

酶活定義：37℃，pH6.8 時，每 10⁴個細胞每分鐘催化產生 1nmol NADPH 為一個酶活單位。

SP 活性（nmol/min/104 cell）= △A / (s × d)  ×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞數量（萬個）)÷T=804× △A÷細胞數量（萬個）

s：NADPH 摩爾消光系數，6220 L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應體系總體積， 2mL；V 樣：反應體系中樣本體積，0.2mL；W：樣本質量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL；T：反 應時間，2min

注意事項：

1. 粉劑-20℃保存，配制好的試劑 3 天內使用完。

2. 可選用 BCA 法測定蛋白含量試劑盒測定蛋白含量。

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